前 言
本标准代替 GB/T 4789.40-2008 《食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》 。
本标准与GB/T 4789.40-2008相比，主要变化如下：
——修改了标准的中英文名称；
——删除了附录A中A.3。
本标准的附录A、附录B为规范性附录。
本标准所代替的历次版本发布情况为：
——GB/T 4789.40-2008。
1 范围
本标准规定了食品中阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）的检验方法。
本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
2.1 恒温培养箱：25 ℃±1 ℃，36 ℃±1 ℃，44 ℃±0.5 ℃。
2.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
2.3 恒温水浴箱：44 ℃±0.5 ℃。
2.4 天平：感量 0.1 g。
2.5 均质器。
2.6 振荡器。
2.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
2.8 无菌锥形瓶：容量 100 mL、200 mL、2000 mL。
2.9 无菌培养皿：直径 90 mm。
2.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。
2.11 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂
3.1 缓冲蛋白胨水（buffer peptone water，BPW）：见附录 A 中 A.1。
3.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycin
medium，mLST-Vm）：见附录 A 中 A.2。
3.3 阪崎肠杆菌显色培养基。
3.4 胰蛋白胨大豆琼脂（trypticase soy agar，TSA）：见附录 A 中 A.3。
3.5 生化鉴定试剂盒。
3.6 氧化酶试剂：见附录 A 中 A.4。
3.7 L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录 A 中 A.5。
3.8 L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录 A 中 A.6。
3.9 L-精氨酸双水解酶培养基：见附录 A 中 A.7。
3.10 糖类发酵培养基：见附录 A 中 A.8。
3.11 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录 A 中 A.9。
第一法 阪崎肠杆菌的检验
4 检验程序
阪崎肠杆菌检验程序见图 1。
5 操作步骤
5.1 前增菌和增菌
取检样 100 g（mL）加入已预热至 44 ℃装有 900 mL 缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃培养 18 h±2 h。移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44℃±0.5℃培养24 h±2 h。
5.2 分离
5.2.1 轻轻混匀 mLST-Vm 肉汤培养物，各取增菌培养物 1 环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。
5.2.2 挑取 1 个～5 个可疑菌落，划线接种于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培养 48 h±4 h。
5.3 鉴定
自 TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表 1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
表 1 阪崎肠杆菌的主要生化特征
6 结果与报告
综合菌落形态和生化特征，报告每 100 g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
第二法 阪崎肠杆菌的计数
7 操作步骤
7.1 样品的稀释
7.1.1 固体和半固体样品：无菌称取样品 100 g、 1 0 g、1 g 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分溶解，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
7.1.2 液体样品：以无菌吸管分别取样品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分混匀，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18h±2h。分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
7.2 分离、鉴定
同 5.2，5.3。
8 结果与报告
综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查 MPN 检索表，报告每 100 g（mL）样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值（见附录Ｂ中表 B.1）。
|
